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小鼠黃嘌呤脫氫酶(XDH)ELIS試劑盒使用說明書

日期:2021-10-19 22:36
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摘要:實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠黃嘌呤脫氫酶(XDH)水平。用純化的小鼠黃嘌呤脫氫酶(XDH)抗體包被微孔板,製成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入黃嘌呤脫氫酶(XDH),再與HRP標記的黃嘌呤脫氫酶(XDH)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體複合物,經過徹底洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的黃嘌呤脫氫酶(XDH)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠黃嘌呤脫氫酶(XDH)活性濃度。

檢測範圍: 96T

7 IU/L -260 IU/L


使用目的:

試劑盒用於測定小鼠血清,血漿及相關液體樣本中黃嘌呤脫氫酶(XDH)的活性。


實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠黃嘌呤脫氫酶(XDH)水平。用純化的小鼠黃嘌呤脫氫酶(XDH)抗體包被微孔板,製成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入黃嘌呤脫氫酶(XDH),再與HRP標記的黃嘌呤脫氫酶(XDH)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體複合物,經過徹底洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的黃嘌呤脫氫酶(XDH)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠黃嘌呤脫氫酶(XDH)活性濃度。


試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標試劑

6ml×1

8

標準品(480IU/L

0.5ml×1

3

標包被

12孔×8

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

 2張  

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1


標本要求

1.標本采集後盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放於-20℃保存,但應避免反複凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑製辣根過氧化物酶的(HRP)活性。


操作步驟

1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

240 IU/L

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

120 IU/L

4號標準品

150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

60 IU/L

3號標準品

150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

30 IU/L

2號標準品

150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

15 IU/L

1號標準品

150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液


  2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其餘各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然後再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加於酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

  3.溫育:用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。  

  4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用

  5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩幹,每孔加滿洗滌液,靜置30秒後棄去,如此重複5次,拍幹。

  6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

  7.溫育:操作同3。

  8.洗滌:操作同5。

  9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鍾.

10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液後15分鍾以內進行。


操作程序總結:


計算

 以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。


注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後方可使用,酶標包被板開封後如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,並經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間zui好控製在5分鍾內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時做標準曲線,zui好做複孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大於標準品孔di 一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測定,計算時請zui後乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5.封板膜隻限一次性使用,以避免交叉汙染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。


保存條件及有效期

1.試劑盒保存:2-8℃。

2.有效期:6個月